Tutti sanno che ci sono molti laboratori, quindi quante persone conoscono i laboratori PCR? E quali sono i requisiti di base per progettare laboratori PCR? Poi ci sarà VOLAB Xiaobian per discutere con tutti~
1, disposizione del laboratorio PCR
Il laboratorio dei test di amplificazione PCR è diviso in linea di principio in quattro aree di lavoro separate: area di conservazione e preparazione dei reagenti, area di preparazione dei campioni, area di preparazione e amplificazione della miscela di reazione di amplificazione e area di analisi dei prodotti di amplificazione. Per evitare la contaminazione incrociata-, l'accesso a ciascuna area di lavoro deve seguire rigorosamente un'unica direzione, ovvero solo dall'area di conservazione e preparazione dei reagenti → area di preparazione dei campioni → area di preparazione e amplificazione della miscela di reazione di amplificazione → area di analisi del prodotto di amplificazione. Il trasferimento del reagente e del campione tra ciascuna zona sperimentale deve essere eseguito attraverso una finestra di trasferimento.
2. Progettazione del sistema di ventilazione dell'aria condizionata da laboratorio e controllo della pressione
I laboratori PCR non hanno requisiti di purificazione rigorosi, ma per evitare la possibilità di contaminazione incrociata-tra le varie aree sperimentali, è consigliabile utilizzare un sistema di distribuzione dell'aria a flusso completo-. Allo stesso tempo, la proporzione tra invio e scarico dovrebbe essere rigorosamente controllata per garantire i requisiti di pressione di ciascuna area sperimentale.
2.1, zona preparazione campioni
Le principali operazioni in quest'area sono la conservazione dei campioni, l'estrazione degli acidi nucleici (RNA, DNA), la conservazione e la loro aggiunta alle provette di reazione di amplificazione e la determinazione della sintesi del DNA. I requisiti del gradiente di pressione in quest'area sono: pressione positiva relativa all'area adiacente per evitare la contaminazione di aerosol dall'area adiacente in quest'area. Inoltre, a causa della possibilità di contaminazione indotta da aerosol-durante l'operazione di carico, è necessario evitare di camminare non necessario nell'area.
2.2. Area di stoccaggio e preparazione dei reagenti
Le operazioni principali in quest'area sperimentale sono la preparazione dei reagenti di conservazione, la dispensazione dei reagenti e la preparazione delle principali miscele di reazione. I reagenti e i materiali utilizzati per la preparazione dei campioni devono essere spediti direttamente in quest'area e non devono passare attraverso altre aree. Le materie prime dei reagenti devono essere conservate in quest'area e preparate nell'area nei reagenti di conservazione richiesti. Non esistono requisiti rigorosi per il controllo della pressione dell'aria.
2.3, area analisi prodotti di amplificazione
L'operazione principale in quest'area è la determinazione dei frammenti amplificati. Questa zona è la principale fonte di contaminazione del prodotto amplificato. Pertanto, i requisiti del gradiente di pressione per quest'area sono: Pressione negativa relativa all'area adiacente per evitare la diffusione dei prodotti amplificati dall'area ad altre aree.
2.4, preparazione della miscela di reazione di amplificazione e zona di amplificazione
L'operazione principale in quest'area è l'amplificazione del DNA. Inoltre, in quest'area può essere effettuata anche l'aggiunta del modello di DNA preparato (dall'area di preparazione del campione) e della miscela di reazione principale (dall'area di conservazione e preparazione dei reagenti) per preparare una miscela di reazione, ecc. I requisiti del gradiente di pressione in quest'area sono: pressione negativa rispetto all'area adiacente per evitare perdite di aerosol dall'area. Per evitare l'inquinamento causato dagli aerosol, le passeggiate inutili nella zona dovrebbero essere ridotte al minimo. Le singole operazioni, come il campionamento, devono essere eseguite sul banco pulito.
3.1. Rigorosa divisione dell'area di lavoro
(1) L'impostazione di ciascuna area sperimentale è ragionevole;
(2) Ciascuna area sperimentale dovrebbe avere segni evidenti (come numeri civici evidenti o colori di fondo diversi, ecc.) per evitare confusione tra apparecchiature e reagenti in diverse aree sperimentali.
3.2, impostazioni di sistema ragionevoli
(1) Impostazione ragionevole del sistema di ventilazione dell'aria condizionata-, provare a utilizzare l'intero sistema di-invio dell'aria condizionata-;
(2) Il rigoroso controllo della pressione del flusso d'aria garantisce diversi requisiti di pressione in diverse aree sperimentali.
3.3, il funzionamento standard
(1) I tecnici del laboratorio di ispezione dell'amplificazione devono svolgere la formazione-sul-lavoro e possono impegnarsi in test clinici di amplificazione genetica solo dopo aver superato la formazione;
(2) Durante l'operazione sperimentale, l'operatore deve indossare guanti e sostituirli frequentemente. Inoltre, anche l’uso di tappi monouso durante il funzionamento è una misura efficace per prevenire la contaminazione;
(3) Il lavoro di pulizia è tempestivo e corretto. Al termine dell'esperimento, l'area deve essere pulita immediatamente. Oltre ai convenzionali liquidi disinfettanti per la disinfezione delle superfici o per l'irradiazione e la disinfezione di lampade a raggi ultravioletti, alcune apparecchiature sperimentali dovrebbero essere sottoposte anche a sterilizzazione ad alta pressione.
3.4, gestione rigorosa
(1) Controllare rigorosamente il personale che entra ed esce dal laboratorio. Persone estranee all'esperimento non potranno entrare o uscire dal laboratorio a loro piacimento e, se necessario, dovranno allestire passaggi e porte indipendenti da e verso tutta l'area sperimentale.
(2) Ridurre al minimo gli spostamenti non necessari nell'area sperimentale per ridurre la possibilità di-contaminazione incrociata.
(3) L'area di analisi del prodotto amplificato è la più importante fonte di contaminazione del prodotto amplificato. La soluzione di scarto non può essere scaricata nel laboratorio. Deve essere immerso nella soluzione disinfettante e poi smaltito in un luogo lontano dal laboratorio. Le punte utilizzate sono monouso. I materiali dovrebbero inoltre essere disinfettati e sterilizzati e poi trattati in modo uniforme, come l'incenerimento;
(4) L'area di analisi del prodotto di amplificazione può utilizzare alcune mutazioni genetiche e sostanze tossiche e particolare attenzione dovrebbe essere prestata alla protezione della sicurezza dello sperimentatore.
3.5. Strutture di laboratorio complete
Strutture complete di supporto al laboratorio sono condizioni necessarie per garantire il lavoro sperimentale. Le attrezzature e gli strumenti corrispondenti devono essere attrezzati in base ai diversi contenuti sperimentali di ciascun laboratorio, come banchi ultra-puliti, centrifughe e alimentatori di campioni.