La cabina di sicurezza biologica di Classe III offre garanzie di sicurezza assolute che le cabine di sicurezza di Classe I e Classe II non sono in grado di fornire. Tutti gli armadi di sicurezza biologica di classe 3 sono completamente chiusi. L'esperimento è stato eseguito completamente attraverso i guanti della finestra anteriore. Durante l'operazione quotidiana, l'interno dell'armadio manterrà sempre una pressione negativa. Anche in caso di guasto di un sistema di prevenzione dell'inquinamento fisico, può farlo.
Tutti gli armadi di sicurezza biologici di Classe 3 sono protetti dall'aria pulita filtrata dal filtro HEPA e impediscono la contaminazione incrociata del campione. Il gas di scarico viene solitamente filtrato attraverso HEPA. O utilizzare due filtri HEPA affiancati. Gli articoli necessari per l'esperimento sono stati inseriti nell'armadio insieme al canale di isolamento posto sul lato dell'armadio. Gli armadi di sicurezza di livello 3 di solito indirizzano il gas di scarico al laboratorio. Tuttavia, l'aria può anche essere scaricata direttamente nell'ambiente esterno attraverso un tubo di scarico esterno. Quando si utilizza un sistema di tubazioni di scarico, un armadio di sicurezza a tre livelli è adatto anche per operazioni microbiologiche che richiedono l'aggiunta di sostanze chimiche tossiche durante il test. Tutti gli armadi di sicurezza biologica di classe 3 possono essere utilizzati in esperimenti con fattori microbiologici che coinvolgono livelli di biosicurezza ai livelli uno, due, tre e quattro.